問(wèn)：什么是Air Cooling功能？

答：帶Air Cooling功能的型號(hào)在底部具有風(fēng)扇，能促進(jìn)空氣快速的流通，及時(shí)排出處理樣品過(guò)程中產(chǎn)生的熱量。正常情況下，不帶風(fēng)冷功能的Bullet Blender處理一次樣品，儀器內(nèi)部溫度會(huì)升高5攝氏度左右，如果不同批次樣品連續(xù)處理，由于儀器內(nèi)部熱量得累積效應(yīng)，使得溫度升高較多，Air Cooling功能可以及時(shí)將產(chǎn)生的熱量排出儀器，保持儀器內(nèi)部和環(huán)境溫度接近。如果將Bullet Blender放在冷藏柜中運(yùn)行，可以保證樣品一直處于較低溫度。

問(wèn)：在Bullet Blender上可以使用什么類(lèi)型的樣品管？

答：Bullet Blender和Bullet Blender Blue可以使用1.5 mL、1.7 mL和 2.0 mL尖底或圓底高質(zhì)量聚丙烯微量離心管。不同形狀的離心管處理效果會(huì)有細(xì)微的差異，推薦使用Eppendorf Safe-Lock 1.5 mL微量離心管（訂貨號(hào)：0030 120.086）。Bullet Blender也可以使用帶旋蓋的1.5 mL微量離心管，需要更換配件已達(dá)到1.5 mL普通離心管和1.5 mL帶旋蓋離心管的互換。

問(wèn)：怎樣在Bullet Blender上設(shè)置混合、破碎或均質(zhì)模式？

答：可以調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)速和處理周期來(lái)達(dá)到不同的處理目的。當(dāng)對(duì)堅(jiān)硬樣品進(jìn)行均質(zhì)時(shí)，需要將速度設(shè)置到最大，處理周期也會(huì)相應(yīng)延長(zhǎng)。如果是對(duì)樣品進(jìn)行混合，在較低轉(zhuǎn)速就可實(shí)現(xiàn)。

問(wèn)：操作Bullet Blender是否方便？

答：只需將裝有樣品、研磨珠和緩沖液的離心管放在支架上，蓋上上蓋，設(shè)置處理速度和周期，按Start鍵即可，所有的樣品會(huì)同時(shí)處理完畢。

問(wèn)：離心管中樣品量應(yīng)該為多少比較合適？

答：對(duì)于1.5或2.0ml的樣品管，推薦使用50-300毫克樣品。少于50毫克也能處理，只是需要增大研磨珠和樣品之間的質(zhì)量比，大于300毫克的樣品也可以處理，但前提是保證樣品和研磨珠在樣品管內(nèi)能有較大自由活動(dòng)的空間，如果樣品+研磨珠+緩沖液的體積超過(guò)樣品管容量的75%，樣品的破碎效率會(huì)受到較大影響。

問(wèn)：處理多個(gè)樣品時(shí)是否需要對(duì)樣品管進(jìn)行平衡？

答：不需要，樣品管放在哪個(gè)孔內(nèi)沒(méi)有限制，如果樣品管少，盡量將樣品管均勻間隔放置即可。

問(wèn)：是否可以對(duì)液氮冷凍過(guò)的樣品進(jìn)行處理？

答：可以，將液氮冷凍過(guò)的樣品放入低溫緩沖液使其解凍，然后就可以進(jìn)行正常操作了。如果樣品在冷凍之前是脫水干燥的，可以直接對(duì)樣品進(jìn)行處理（在樣品管內(nèi)只加入樣品和研磨珠，不加緩沖液），處理一段時(shí)間后再加入低溫緩沖液，再處理一遍，可以得到很好的效果。不能直接處理冷凍的大塊濕態(tài)樣品，否則破碎效率會(huì)不理想。

注：如果要破碎經(jīng)液氮處理過(guò)的樣品，務(wù)必使用Eppendorf 1.5mL Safe-Lock微量離心管（訂貨號(hào)：0030 120.086）。

問(wèn)：我需要處理的樣品對(duì)溫度比較敏感，處理過(guò)程中要求溫度不超過(guò)10度，怎么滿足要求？

答：現(xiàn)在Bullet Blender的所有型號(hào)都不帶強(qiáng)制制冷功能，如果處理過(guò)程中對(duì)溫度要求較高，可以考慮以下方法。提前15分鐘，將Bullet Blender放入不低于4度的冷藏柜，然后將樣品、研磨珠和提取緩沖液加入到樣品管以后，將整個(gè)樣品管放入冰箱（低于-20度，如果溫度低于-30度，請(qǐng)使用質(zhì)量較好的樣品管）冷凍一段時(shí)間，待管內(nèi)液體凍結(jié)實(shí)后，直接放入Bullet Blender進(jìn)行處理，冰塊融化的同時(shí)，研磨珠對(duì)樣品進(jìn)行破碎，這樣可以保證樣品一直處于低溫狀態(tài)。

問(wèn)：怎樣從樣品管中回收樣品？

答：只需要進(jìn)行低速離心將研磨珠和無(wú)用的組織細(xì)胞碎片濃縮在管底，然后吸取上清液，即可進(jìn)行后續(xù)提取。提取DNA時(shí)，氯仿抽提以及之前的步驟都可以在最初的樣品管中進(jìn)行。

問(wèn)：各種研磨珠（玻璃、硅酸鋯、氧化鋯和不銹鋼）之間的區(qū)別是什么？

答：不同的樣品需要不同材質(zhì)的研磨珠，玻璃、硅酸鋯、氧化鋯和不銹鋼之間最重要的區(qū)別是密度不同。玻璃的密度最低，硅酸鋯、氧化鋯和不銹鋼的密度分別是玻璃的1.5、2.2和3.2倍。玻璃適合處理密度較低的樣品，硅酸鋯和氧化鋯適合處理中等密度的樣品，不銹鋼適合處理高密度的樣品。玻璃、硅酸鋯和氧化鋯研磨珠較穩(wěn)定，不易和樣品或緩沖液中的物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)，不銹鋼研磨珠研磨過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生金屬離子，可能會(huì)和樣品或緩沖液中的物質(zhì)發(fā)生反應(yīng)，影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。絕大多數(shù)樣品選擇氧化鋯研磨珠可以得到滿意的效果。

問(wèn)：應(yīng)該選擇什么樣的研磨珠？

答：選擇研磨珠最基本的兩條原則是：（1）越堅(jiān)硬的樣品使用密度越大的研磨珠；（2）使用和樣品細(xì)胞大小相當(dāng)?shù)难心ブ�，以保證研磨珠和樣品的充分接觸，比如：破碎細(xì)菌使用0.1mm的玻璃研磨珠即可，破碎大塊組織使用1mm以上不銹鋼或氧化鋯研磨珠。為了得到更好的處理效果，通�？梢詫�(duì)大小尺寸研磨珠進(jìn)行組合，大尺寸的研磨珠將組織打碎或增加小尺寸研磨珠的撞擊力度，小尺寸的研磨珠進(jìn)一步將細(xì)胞或細(xì)胞團(tuán)破碎。

問(wèn)：我曾經(jīng)使用其它品牌的研磨珠型破碎儀，我是否可以在Bullet Blender上使用相同的實(shí)驗(yàn)方案？

答：不行。和市場(chǎng)上其它產(chǎn)品的原理有所不同，Bullet Blender使用專(zhuān)利的擊打技術(shù)，使得Bullet Blender的破碎效率更高而產(chǎn)熱更小。用戶可以參考我們針對(duì)不同樣品的推薦方案或自己對(duì)實(shí)驗(yàn)方案進(jìn)行優(yōu)化。

問(wèn)：是否可以重復(fù)利用研磨珠？

答：可以，1mm以上的研磨珠都較容易回收，可以多次重復(fù)利用。直徑小于1mm的研磨珠，不易回收，建議一次性使用。

問(wèn)：研磨珠可以重復(fù)使用多少次？

答：研磨珠重復(fù)使用次數(shù)并沒(méi)有限制，研磨珠的磨損程度視樣品堅(jiān)硬程度、設(shè)置處理速度和處理周期而定，一般情況下，氧化鋯研磨珠可以重復(fù)使用20次以上。

問(wèn)：怎么清洗研磨珠？

答：使用實(shí)驗(yàn)室常用清潔劑就行，用去離子水多次潤(rùn)洗，確保在干燥研磨珠之前沒(méi)有殘留泡沫。玻璃研磨珠也可以使用濃鹽酸清洗。但鹽酸會(huì)和氧化鋯研磨珠表面，產(chǎn)生具有活性的陶瓷中間產(chǎn)物，可能會(huì)干擾后續(xù)實(shí)驗(yàn)。所以我們不建議使用酸液清洗硅酸鋯或氧化鋯研磨珠，也不建議用酸液清洗不銹鋼研磨珠。

問(wèn)：提取RNA 需要注意什么問(wèn)題？

答：RNA提取前對(duì)樣品進(jìn)行破碎，最重要的是去除RNA酶的干擾，需要使用RNase Zap®（Ambion, Inc.）或RNase Away®（Molecular BioProducts）處理研磨珠和樣品管，然后使用無(wú)核酸酶的純凈水潤(rùn)洗，最后進(jìn)行高壓滅菌。如果沒(méi)有去RNA酶的試劑，也可以將研磨珠在232℃烘烤2小時(shí)以上，即可去活RNA酶。

問(wèn)：怎么對(duì)研磨珠進(jìn)行滅菌？

答：可以對(duì)研磨珠進(jìn)行高壓濕熱滅菌或干熱滅菌。滅菌后研磨珠可能會(huì)粘連在一塊，只需要輕搖就可以將粘連的研磨珠分開(kāi)。另外也可以使用伽馬射線或環(huán)氧乙烷滅菌。

問(wèn)：針對(duì)實(shí)際樣品如何選擇研磨珠？

答：請(qǐng)參考網(wǎng)站研磨珠選擇指南。基本原則是：為了使樣品和研磨珠之間的作用最大化，使用和樣品規(guī)格相當(dāng)?shù)难心ブ椋�越�?jiān)韌的樣品使用密度越大的研磨珠。針對(duì)樣品的特征和提取的需要，可以使用2-3種不同規(guī)格的研磨珠進(jìn)行組合，可以得到更好的處理效果。

問(wèn)：樣品在處理過(guò)程中，樣品管是否會(huì)經(jīng)常出現(xiàn)破裂的現(xiàn)象？

答：如果使用高質(zhì)量的聚丙烯離心管，在有效的處理時(shí)間內(nèi)，不會(huì)出現(xiàn)破裂的現(xiàn)象。當(dāng)需要使用液氮冷凍樣品管時(shí)，務(wù)必使用Eppendorf 的1.5mL Safe-Lock微量離心管（訂貨號(hào)：0030 120.086）。

問(wèn)：有些樣品比較輕，容易漂浮在緩沖液面上，處理效果不佳，是否有解決辦法？

答：使用移液器吸頭盡量將樣品推至管底，然后加入研磨珠，兩者比例可以增至3:1—4:1，最后加入緩沖液�；蛘咴跇悠饭苤兄患尤霕悠泛脱心ブ�，然后將試管放入液氮冷凍20秒鐘，然后直接放入Bullet Blender中進(jìn)行處理。

問(wèn)：組織含有大量纖維，韌性太強(qiáng)，破碎效果不好怎么辦？

答：樣品中的大量纖維的確會(huì)影響破碎效果，一方面可以使用密度更大的研磨珠，減少樣品量，同時(shí)增加處理時(shí)間和速度；另一方面可以將樣品經(jīng)過(guò)液氮處理，在樣品管中只加入樣品和研磨珠，然后將試管放入液氮冷凍20秒鐘，讓纖維組織變脆，然后直接放入Bullet Blender中進(jìn)行處理，會(huì)得到更好的效果。

問(wèn)：樣品管在處理過(guò)程中管蓋密封不嚴(yán)，容易漏液，怎么辦？

答：對(duì)于質(zhì)量比較差的離心管，的確存在管蓋密封不嚴(yán)，處理過(guò)程中出現(xiàn)漏液的情況。我們推薦使用Eppendorf 的1.5mL Safe-Lock微量離心管（訂貨號(hào)：0030 120.086），該離心管的帶鉤管蓋，可防止管蓋意外打開(kāi)。

問(wèn)：樣品太堅(jiān)硬不易破碎怎么辦？

答：對(duì)于一些特別堅(jiān)硬的樣品，如：硬骨骼、軟骨、指甲、魚(yú)鱗、種子等，在破碎之前可以使用液氮進(jìn)行預(yù)處理，使樣品變脆后更易處理，見(jiàn)前面問(wèn)題7。

問(wèn)：我在使用試劑盒提取樣品中的核酸和蛋白，一些試劑盒要求使用的緩沖液量和Bullet Blender推薦的使用量不同，該怎么辦？

答：如果您使用的試劑盒要求使用的緩沖液量比Bullet Blender推薦使用的量多，可以先使用Bullet Blender推薦的量，待樣品處理完后再將余下的緩沖液加入樣品管。如果您使用的試劑盒要求使用的緩沖液量比Bullet Blender推薦使用的量少，使用Bullet Blender推薦的量或?qū)⒃噭┖械木彌_液進(jìn)行稀釋以達(dá)到Bullet Blender推薦的量。如果使用液氮預(yù)處理樣品，就不需提前加入緩沖液，緩沖液的加入量就可以嚴(yán)格按照試劑盒要求的量進(jìn)行。