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中國水稻所大規(guī)模利用直接PCR方法加快分子輔助育種的過程
分子標(biāo)記輔助育種技術(shù)是在水稻、小麥、玉米、大豆、油菜等重要作物上，通過利用與目標(biāo)性狀緊密連鎖的 DNA 分子標(biāo)記對目標(biāo)性狀進(jìn)行間接選擇，以在早代就能夠?qū)δ繕?biāo)基因的轉(zhuǎn)移進(jìn)行準(zhǔn)確、穩(wěn)定的選擇，從而加速育種進(jìn)程，提高育種效率，選育抗病、優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)的品種。
目前植物PCR分子標(biāo)記檢測需復(fù)雜的樣品前處理步驟和核酸抽提步驟，需耗費(fèi)大量的人力物力。為徹底解決這個(gè)問題，著名的生物技術(shù)公司Genebank Biosciences Inc開發(fā)了高效植物一步法直接PCR試劑，無需抽提植物DNA，即可進(jìn)行高效的PCR反應(yīng)。一個(gè)操作人員完成96個(gè)植物樣品前處理僅需5-10min, 一天可輕松完成幾千個(gè)樣品的PCR檢測，所需試劑成本低。該方法操作快，效率高，成本低，目前已在中國水稻所等著名研究機(jī)構(gòu)廣泛使用，成功用于大規(guī)模的分子標(biāo)記輔助育種檢測和轉(zhuǎn)基因檢測。
具體的實(shí)驗(yàn)流程如下：
1． 一步法樣品前處理： 每棵苗收取一小片幼葉(5-10mg)到GEB 96孔板（每孔裝有50-100ul DNA萃取液），硅膠膜封口, 75度放置15min,
或用自動研磨儀運(yùn)行1-2min混勻后孵育.
2. PCR體系構(gòu)建：每孔吸取1-2ul萃取液直接作為DNA模板，和GBI supermix一起加入PCR板
3. PCR擴(kuò)增和檢測
該方法優(yōu)點(diǎn)：
1． 一步法直接PCR法可批量操作,速度快,省時(shí)省力,每人每天可輕松處理上千個(gè)植株樣品
2． 無需核酸抽提和復(fù)雜樣本前處理,節(jié)約時(shí)間,提高效率
3． 超強(qiáng)抗抑制Tag酶技術(shù)保證PCR高效率進(jìn)行
4． 大大加快分子輔助育種進(jìn)程,可用于普通PCR，多重PCR，定量PCR和基因芯片等應(yīng)用
結(jié)合MultiNA全自動電泳系統(tǒng),可實(shí)現(xiàn)PCR產(chǎn)物檢測的完全自動化和精確分析
 
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