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  • MultiNA微芯片電泳儀
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cDNA過表達慢病毒載體構(gòu)建服務(wù)
cDNA過表達慢病毒載體構(gòu)建
   
    我們采用的是美國進口第三代慢病毒載體用于cDNA過表達慢病毒載體構(gòu)建(詳情請參見慢病毒載體信息),相比較而言,我們的載體具有更多的優(yōu)勢:
1、 含多種組成型EF1a /MSCV /CMV/Ubc啟動子,保證cDNA穩(wěn)定高表達;
2、含T2A肽鏈、3 ΔLTR (ΔU3)、SV40多聚A加尾信號等多種優(yōu)化過的優(yōu)勢元件,保證慢病毒載體能夠效包裝成病毒顆粒,并且整合到細胞基因組之后,實現(xiàn)高安全性、低免疫原性、穩(wěn)定長效表達;
3、含多個MSC位點或LCS無連接酶克隆位點、多種報告基因及抗性基因,選擇更靈活;
4、 使用無連接酶克隆載體能插入長達5Kb cDNA序列
5、載體信息具有可追溯性,每種載體都具有對應(yīng)的國外參考文獻及數(shù)據(jù),便于文獻發(fā)表;
 
組成型啟動子:
 
啟動子
表達水平
應(yīng)用
CMV
常規(guī)用于絕大多數(shù)細胞系.像Hela細胞、HEK293細胞、HT1080細胞等
MCSV
造血干細胞、干細胞等
EF1
強啟動子,用于絕大多數(shù)原代細胞、細胞株和干細胞等
PGK
強啟動子,用于絕大多數(shù)原代細胞、細胞株和干細胞等
UbC
低和穩(wěn)定表達, 用于絕大多數(shù)原代細胞、細胞株和干細胞等

 
多種優(yōu)勢元件:
3 ΔLTR (ΔU3)
3’ LTR區(qū)域刪除了U3,使其不再有啟動/增強活性,成為自滅活(self-inactivating, SIN)載體,即整合到細胞基因組后,不會產(chǎn)生新的子代病毒,也降低了對周圍基因的意外激活。
 
copGFP
綠色熒光報告基因,與常用的EGFP類似,但熒光更亮。
 
pUC起始點
使質(zhì)粒在 E.coli 中高密度拷貝并且保持穩(wěn)定。
 
RSV/5’LTR RSV雜交啟動子-R/U5’長末端重復(fù)序列)
讓全長病毒在293前體細胞中高水平包裝和轉(zhuǎn)錄表達。
 
CMV/5’LTR CMV雜交型啟動子-R/U5長末端重復(fù)序列)
使慢病毒載體保持高水平轉(zhuǎn)錄和高效轉(zhuǎn)錄出含病毒包裝必需功能元件(如Psi, RRE, and cPPT等)的轉(zhuǎn)錄本,當用病毒包裝細胞系(如HEK 293細胞)包裝病毒時也能表達病毒衣殼蛋白。
 
SV40起始點
使質(zhì)粒在哺乳動物細胞中穩(wěn)定復(fù)制。
 
SV40多聚A加尾信號
強制轉(zhuǎn)錄終止子,有效終止轉(zhuǎn)錄或者終止共轉(zhuǎn)錄過程,維持穩(wěn)定態(tài)mRNA高水平表達。
 
LCS無連接酶克隆位點
不依賴多克隆位點,能將各種目的cDNA插入載體,不需要DNA鏈接酶,較常規(guī)方法可靠。
 
Kozak序列
優(yōu)化轉(zhuǎn)錄啟動與翻譯效率。
 
HA標簽
目標蛋白識別與純化。
 
WPRE元件
增強CMV啟動轉(zhuǎn)錄的穩(wěn)定性。
 
說明:每種載體用的優(yōu)勢元件均有所不同
 
 
客制化服務(wù)方案:
 
  目前我們能夠為客戶提供包括cDNA釣取、慢病毒載體構(gòu)建、測序、慢病毒生產(chǎn)等一站式服務(wù)。我們的服務(wù)將為客戶最大限度地提高效率和節(jié)省時間,另外,我們的技術(shù)專家將為您的實驗提供全程支持,如有疑問,請Email至[email protected].cn。
  我們可為客戶提供cDNA過表達慢病毒載體構(gòu)建服務(wù)的個性化定制服務(wù)方案,包括根據(jù)目的基因特征、目的細胞特征與客戶需求,我們會為客戶選擇最合適的慢病毒載體、啟動子、熒光標記或選擇性抗性標記,插入目的基因使其過表達,客戶也可以根據(jù)我們的載體信息自行挑選;同時又可以根據(jù)客戶的需要,可在重組慢病毒載體中加入各種報告基因或標簽(或進行改造),從而構(gòu)建cDNA過表達慢病毒載體。
  雖然我們有標準的客制化服務(wù)流程,同時我們也會根據(jù)客戶需求,為每個客戶度身定制各種cDNA慢病毒載體構(gòu)建服務(wù)方案。如有需要,歡迎致電021-34512321咨詢。
 
 
標準客制化服務(wù)流程:
 
 
 
cDNA過表達載體構(gòu)建服務(wù)列表:
       
  我們可以根據(jù)客戶需求構(gòu)建各種濃度的超純純化cDNA過表達慢病毒載體,載體能被包裝成cDNA過表達慢病毒顆粒;無內(nèi)源性多聚A信號;對靶細胞無毒;從5 to 3 LTR序列大小大于8kb;采用無連接酶克隆系統(tǒng),插入目的cDNA序列最大達5kb;可直接轉(zhuǎn)染細胞,用于瞬時轉(zhuǎn)染;也可以包裝成病毒顆粒感染細胞,用于穩(wěn)定長效表達。
 
超純純化標準:
              內(nèi)毒素<10EU/mg質(zhì)粒DNA
              RNA<0.2ug/mg
              基因組DNA<2ug/mg
              蛋白<3ug/mg
 
編號
cDNA過表達慢病毒載體構(gòu)建
標準
工作日
C200001
10 μg
超純純化
10
C200002
20 μg
超純純化
10
C200003
40 μg
超純純化
10
 
 
 
 
 
 
 
成功案例:
 
 
 
參考文獻:
   
1、Karthikeyan Veeraraghavalu, Se Hoon Choi, Xiaoqiong Zhang and Sangram S. Sisodia. Presenilin 1 Mutants Impair the Self-Renewal and Differentiation of Adult Murine Subventricular Zone-Neuronal Progenitors via Cell-Autonomous Mechanisms Involving Notch Signaling. J. Neurosci., May 19, 2010, 30(20):6903– 6915. (PDF) »
2、Lyndee L. Scurr, Gulietta M. Pupo, Therese M. Becker, Ken Lai, David Schrama, Sebastian Haferkamp,Mal Irvine, Richard A. Scolyer, Graham J. Mann, Jurgen C. Becker, Richard F. Kefford, and Helen Rizos.   IGFBP7 Is Not Required for B-RAF-Induced Melanocyte Senescence. Cell 141, 717–727, May 14, 2010. (PDF) »
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13、Methods in Molecular Biology. Volume 246. Gene delivery to mammalian cells. Volume 2: Viral Gene transfer techniques. Ed. by W. C. Heiser. (2004), Humana Press.
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15、Li MJ, Rossi JJ. Lentiviral vector delivery of recombinant small interfering RNA expression cassettes. Methods Enzymol. 2005;392:218-26.
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