穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建服務(wù)
一、穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建服務(wù)介紹
建立體外培養(yǎng)穩(wěn)定細(xì)胞株對許多研究者來說是件非常痛苦的事，主要是因?yàn)椋?nbsp;
1、耗時(shí)周期長（一般順利的話，從轉(zhuǎn)染到鑒定完成凍存細(xì)胞要2個(gè)月左右），中途一旦發(fā)生污染則前功盡棄，最后得不到單克隆也需要重新開始；
2、對細(xì)胞培養(yǎng)要求高，要保證細(xì)胞狀態(tài)良好，尤其是保證無支原體污染，并能從單個(gè)細(xì)胞長成單克�。�
3、需要積累很多經(jīng)驗(yàn)，才能高效一次成功篩選出整合率100%的單克隆，從而避免常見的單克隆不純現(xiàn)象；
4、建立誘導(dǎo)表達(dá)穩(wěn)定株更是許多研究人員的噩夢，花費(fèi)半年時(shí)間試圖建立一個(gè)誘導(dǎo)表達(dá)株，最后卻無功而返是極為常見的事；
慢病毒載體由于整合率高，是非常理想的穩(wěn)定株構(gòu)建工具，通過控制慢病毒顆粒的轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)條件，理論上可以確保每個(gè)細(xì)胞只有單拷貝插入。同時(shí)，由于病毒載體是通過病毒重組酶將外源片段整合入染色體中，其整合特性和病毒自身整合特性非常相似，偏向于轉(zhuǎn)錄活躍區(qū)段，且整合后非常穩(wěn)定，在傳代100次后仍然保留在宿主基因組中。最重要的是整合幾率和所有其它化學(xué)，物理轉(zhuǎn)染方法比，增加5至6個(gè)數(shù)量級，使得穩(wěn)定株構(gòu)建不再成為實(shí)驗(yàn)研究的障礙。由于整合幾率非常高，所以很容易獲得混合穩(wěn)定株。
我們采用美國進(jìn)口的第三代慢病毒載體系統(tǒng)（詳見慢病毒載體構(gòu)建服務(wù)），病毒顆粒包膜上嵌合了來自水泡口炎病毒（Vesicular Stomatitis Virus）的VSV-G蛋白，使病毒能感染更多種細(xì)胞（包括分裂、非分裂細(xì)胞、難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞）、模式動物、活體實(shí)驗(yàn)，并且表達(dá)更趨穩(wěn)定。
高度安全：
我們的慢病毒顆粒將生物安全性保證到了最大程度，其中HIV-1來源的pSIH系列shRNA慢病毒載體來源于能用于美國臨床基因治療的慢病毒， 專利號位美國Dr. J. G. Sodroski 的US patent #5,665,577 和 #5,981,276。
3 ΔLTR (ΔU3)
3’ LTR區(qū)域刪除了U3，使其不再有啟動/增強(qiáng)活性，成為自滅活（self-inactivating, SIN）載體，即整合到細(xì)胞基因組后，不會產(chǎn)生新的子代病毒，也降低了對周圍基因的意外激活。
RSV/5’LTR （RSV雜交啟動子-R/U5’長末端重復(fù)序列）
采用雜合型RSV的增強(qiáng)子/啟動子-R/U5’長末端重復(fù)序列，這樣病毒轉(zhuǎn)錄時(shí)不依賴tat的存在，去除了 HIV的tat基因表達(dá)。，tat在HIV-1基因組復(fù)制和轉(zhuǎn)錄延伸過程中發(fā)揮重要作用
慢病毒骨架設(shè)計(jì)
僅保留了三個(gè)HIV-1病毒包裝、復(fù)制與轉(zhuǎn)導(dǎo)必需基因（gag, pol, rev) ，因其缺乏HIV-1增強(qiáng)子啟動子序列，即使存在所有的病毒蛋白也不能轉(zhuǎn)錄出HIV RNA
慢病毒顆粒中無HIV-1基因
因?yàn)镠IV-1表達(dá)的包裝質(zhì)粒都缺乏包裝信息，所以，慢病毒顆粒不具有復(fù)制能力
假病毒顆粒
慢病毒顆粒實(shí)為假病毒顆粒，只表達(dá)目的基因
水皰性口炎病毒(VSV)糖蛋白G包膜
限制慢病毒成為野生型的可能性
二、我們的服務(wù)優(yōu)勢
服務(wù)流程：
慢病毒包裝服務(wù)儲存計(jì)劃：
我們會為客戶將定制好的慢病毒顆粒及載體做額外備份，免費(fèi)儲存一段時(shí)間。以免客戶在后面的實(shí)驗(yàn)中發(fā)生意外而急需。如有需要，也可以更優(yōu)惠的價(jià)格再次訂購。詳情請參見慢病毒包裝服務(wù)儲存計(jì)劃。
技術(shù)力量：
我們的主要生產(chǎn)人員均為博士后或博士，我們生產(chǎn)人員常規(guī)包裝的慢病毒包裝顆粒滴度均在>10^9 IFUs/ml以上。
三、穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建服務(wù)列表
穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建服務(wù)列表：
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編號 |
穩(wěn)定細(xì)胞株構(gòu)建服務(wù) |
可提供細(xì)胞數(shù)量 |
工作日 |
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E200001 |
載體、慢病毒顆粒和穩(wěn)定細(xì)胞株 |
>1*10^ 6~9 個(gè)/ml |
30 |
說明：
1、FIV來源的載體只能包裝成常規(guī)滴度的慢病毒。
2、所表達(dá)片段確保對目的細(xì)胞無毒性或者不抑制細(xì)胞增殖。
3、穩(wěn)定株構(gòu)建服務(wù)需要的細(xì)胞必須確保無支原體，黑膠蟲或者其它微生物，真菌污染。我們只接受ATCC和DSMZ來源的無污染的細(xì)胞，或者由本公司代購ATCC和DSMZ的細(xì)胞株，進(jìn)行細(xì)胞株構(gòu)建服務(wù)。 |
